人(rén)口腔癌細胞系的(de)建立

【關鍵詞】口腔腫瘤;細胞系;綜述

到(dào)目前為(wèi)止，口腔颌面惡性腫瘤病人(rén)的(>★≥↓de)5年(nián)生(shēng)存率←¥σ已達65%左右，其中，口腔癌細胞系的(de★φ∏)建立和(hé)應用(yòng)起了(le)不(bù)可(kě)忽視↔™(shì)的(de)作(zuò)用(yòng)。這(zhè)些(xiē)細胞系為(♥'wèi)體(tǐ)外(wài)和(hé)體(tǐ)內(nèi)研 £•±究腫瘤的(de)生(shēng)物(wù)學特性、診斷、治療提供了(le)有(yǒu)形的(£↓♣de)載體(tǐ)，它涉及到(dào)腫瘤的(de)放(fàδ≠÷≤ng)療、化(huà)療、基因治療等各個(gè)方面的(de)基礎和(hé)臨¥γ★床前研究。繼1981年(nián)我國(guó)首次建立第一(yī)株人(rén)口‍δ×≥腔癌細胞系Tca8113之後^①，20餘年(nián)來(lái)我國(guó)相(xiàng)繼建立了(le)2λ♥≠0餘株口腔癌細胞系。本文(wén)就(jiù)已建立的(de)口腔癌細胞系和(hé)其主↔€¶要(yào)生(shēng)物(wù)學特點做(zuò)一(yī)↔ε綜述。

1、國(guó)內(nèi)已建立的(de)口腔癌細胞系及其特點

1.1 國(guó)內(nèi)建立的(de)細胞系

繼人(rén)舌鱗狀細胞癌細胞系Tca8113建立以來(lái)，國(guó)內(n ←©èi)建立的(de)細胞系還(hái)有(yǒu)人(rén)頰黏膜鱗癌B€≈♦CaCD885、腭腺樣囊性癌ACC2、腮腺腺樣囊性癌ACC3、舌下(₽♦xià)腺腺樣囊性癌SACC83、腭黏液表皮樣癌MEC1、人ε♣≤∑(rén)小(xiǎo)涎腺腺樣囊性癌NACC細胞系、人(rén)牙龈癌頸淋巴結轉↔'移細胞系GNM及舌鱗癌細胞系TSCCa^②,以及與上(shàng)述細胞系相(xiàng)關的(∑ ♣πde)6株高(gāo)轉移細胞系和(hé)3株耐化(huà)療藥物(wù)的(de)細胞↕★≈♦系。此外(wài)還(hái)建立了(le)來(lái)源于嚼槟榔而無吸煙(¶↑♥σyān)史者右頰黏膜鱗癌細胞系OC3^③，腭黏膜黑(hēi)色素瘤細胞系ME^④，等等。

1.2 國(guó)內(nèi)建立的(de)常用(yσ±★ òng)細胞系的(de)生(shēng)物(wù)學特征

1.2.1 Tca8113細胞系 系列Tca8113細胞系來(lái)源于人(rε€δεén)舌鱗狀細胞癌，由上(shàng)海(hǎi)第二醫↔‍(yī)科(kē)大(dà)學附屬第九人(rén)民(mín)醫(yī)院±×口腔颌面外(wài)科(kē)腫瘤生(shēng)物(wù)實驗室何榮根等^①建立，至今已有(yǒu)23年(nián)，該細胞系生(shēng)長(chá'‌φng)穩定，初建系時(shí)群體(tǐ)倍增時₽'(shí)間(jiān)為(wèi)38.8h，分(fēn)裂指數(shù)高(gā€™o)峰值為(wèi)61‰，平闆集落形成率為(w↓ ♣£èi)86.0%;染色體(tǐ)多(duō)數(sh≤₽✔αù)穩定在66條，為(wèi)亞三倍體(tǐ)，有(yǒu)M1标記的(de)染色體($€tǐ)，連續傳代仍保留此有(yǒu)價值标記的(de)染色體(tǐ);接種于兔抗小(xiǎoπ™≠ε)鼠胸腺細胞血清ATS處理(lǐ)的(de)C57BL和(hé)ICR ™小(xiǎo)鼠皮下(xià)，成瘤率為(wèi)100%。周曉健等⑤在此細胞系的(de)基礎上(¥ ♦shàng)建立了(le)對(duì)順鉑(CDDP)耐藥的(de★‌₹☆)細胞系Tca8113/CDDP，耐順鉑的('∞≠de)劑量為(wèi)9.2mg/L。張建國(g ∏>☆uó)等^⑥建立了(le)耐長(cháng)春新堿細胞系Tca8≥ 113/V100，耐長(cháng)春新堿劑量為(wèi)100μmol₩≥</L。第四軍醫(yī)大(dà)學口腔醫(yī)學院吳軍正等^⑦于1999年(nián)通(tōng)過裸鼠尾靜(jìng)脈注射Tca8113細胞‍₽±，取一(yī)有(yǒu)神經症狀的(de)裸鼠腦(nǎo)組織原代培養，建成了(l♠♠₩λe)高(gāo)轉移的(de)細胞系Tb，該細胞染色∏&↑≈體(tǐ)多(duō)數(shù)為(wèi)66條，裸鼠皮下(xià)接種成瘤率100%;與'"∞Tca8113細胞相(xiàng)比，Tb細胞中線粒體★☆(tǐ)更發達，分(fēn)泌顆粒多(duō)，S期細胞百分(fēn)比高(gāo)α♥，群體(tǐ)倍增時(shí)間(jiān)短(duǎn)，軟↓↔瓊脂克隆形成率高(gāo)，在裸鼠體(tǐ)內(nèi)的(de)實驗性肺轉移能(nén✔∏εσg)力明(míng)顯提高(gāo)。又(yòu&↕±✔)通(tōng)過裸鼠舌黏膜下(xià)注射Tb細胞，取頸淋巴結轉移竈建成細胞系TbT↑♥✘l，又(yòu)将TbTl細胞經裸鼠尾靜(jìng)脈注射，取發現(xiàn䀕)截癱的(de)裸鼠脊髓培養，建成了(le)舌鱗癌脊髓≈≈轉移細胞系Ts，該細胞染色體(tǐ)多( ♥&duō)數(shù)為(wèi)60條，裸鼠皮下(xià)接種成瘤率為(wèi)1>ε<00%;與Tb細胞相(xiàng)比，Ts細胞群體(tǐ)倍增時(shí)間(jiā§λ☆©n)短(duǎn)，S期細胞百分(fēn)比高(gāo)，軟瓊脂克隆形成←>™率高(gāo)。

1.2.2 BCaCD885細胞系 人(rén)頰黏膜鱗狀細胞癌細胞系，由華西(xī)醫(yī)科(kē)大(dà)學ε↑口腔醫(yī)學院廖小(xiǎo)宜等^⑧于1990年(nián)建立。該細胞系貼壁率高(gāo)，2h達83%;分(↑'‍σfēn)裂指數(shù)高(gāo)峰值為(wèi)79‰>↕α$;群體(tǐ)倍增時(shí)間(jiān)為(wèi)40.5h;半固體(tǐ)瓊→ ♣÷脂培養克隆形成率為(wèi)29.8%;平闆集落形成率為(wèi)10.3%; ↑α↑染色體(tǐ)多(duō)數(shù)為(wèi)亞三倍體(tǐ)Ω♦≤，有(yǒu)染色體(tǐ)畸變和(hé)15種異常染色體(tǐ)，其有(yǒu)價值的(d©↔e)标記染色體(tǐ)為(wèi)Inc7q;裸鼠皮下(xià)接種成瘤率為(wè‍™i)100%。

1.2.3 MEC1細胞系 系列人(rén)黏液表皮樣癌細胞系MEC1，來(lái)源于腭部，由第四軍醫(yī)大(dà)學£≤✔口腔醫(yī)學院司徒鎮強等于1990年(nián)建立。該細胞系在4h貼壁率為(wèi)86£$<≤.9%，群體(tǐ)倍增時(shí)間(jiā♦"n)約30h，分(fēn)裂指數(shù)高(>&←✘gāo)峰值為(wèi)27‰;染色體(tǐ)為(wèi)亞二倍體(tǐ)，44～4 §×6條;鼠抗人(rén)角蛋白(bái)抗體(tǐ)染色陽性，兔抗人(rén)>↕€分(fēn)泌片(Sc)抗體(tǐ)和(hé←↕)兔抗人(rén)溶菌酶抗體(tǐ)染色均陽性;細胞為(wèi)單™σβδ層生(shēng)長(cháng)，鋪滿♣&ε瓶底後出現(xiàn)漂浮細胞，少(shǎo)見(jiàn)有(yǒu)重疊生(shēng)長→←(cháng)現(xiàn)象。該課題組在MEC™ 1細胞系的(de)基礎上(shàng)建立了(le)耐藥細胞系MEC1/FU，耐FU劑量為(wèiφ¶£±)1.980μg/L，與MEC1相(xiàng)比，$→該細胞系增殖略快(kuài)，軟瓊脂克隆形成率明(míng)顯提高(gāo)，S&α$期細胞增多(duō)，部分(fēn)解釋了(le)其耐藥性産生(shēng✔ )的(de)基礎。該課題組又(yòu)通(tōng)過裸Ω±∏ 鼠尾靜(jìng)脈注射MEC1，篩選出高(gāo)轉移細胞克≤>×隆Mc3，與其母本細胞MEC1比較，Mc3具有(yǒu)生(shēng)♣Ω長(cháng)較快(kuài)，S期細胞比例較高(gāo)，接觸抑制(zh→γε₩ì)力下(xià)降(飽和(hé)密度高(gāo))，在軟瓊脂內α★‍∑(nèi)克隆形成率高(gāo)，野生(shēng)型P53蛋白(bái)表達陽性率低λ&(dī)，裸鼠實驗性肺轉移率高(gāo)等生(shēng)物(>σwù)學特點，表明(míng)Mc3是(shì)一(yī)個(∑ gè)高(gāo)轉移細胞株。該課題組用(yòng)Mc3細胞經裸鼠涎腺移植，鼠間(jiān)原★λ<✔位移植後獲得(de)轉移力提高(gāo)的(÷§'de)M3SP2細胞系。楊宏林(lín)等将Mc3經尾靜(jìng)脈注射獲≠®σ✔得(de)截癱的(de)裸鼠，取其脊髓培養，建立了≤$(le)細胞系Ms，與Mc3相(xiàng)比，Ms增殖速度和(hé)克隆形成‍γ<率均較高(gāo)，但(dàn)裸鼠皮下(>™xià)接種成瘤速度慢(màn)。

1.2.4 SACC83細胞系 人(rén)涎腺腺樣囊性癌細胞系，來(lái)λλ≠源于左舌下(xià)腺，由北(běi)京大(dà)學口腔醫(yī)學院李盛琳σφ↓^⑨于1987年(nián)建立。該細胞高(gāo)峰期分(fēn)裂指數(sh¶<ù)為(wèi)44‰;染色體(tǐ)多(duō)數(shù)為(wèi)98 ♣～100條，為(wèi)亞四倍體(tǐ);裸鼠皮下("♠$₹xià)接種成瘤率為(wèi)100%,以濃度5×108/L接種&π該細胞，于2個(gè)月(yuè)時(shí)成瘤，這(zhè)與腺樣囊性癌轉移、複發所€↕∏需時(shí)間(jiān)較其他(tā)腫瘤長(cháng)的(dα$€e)臨床觀察一(yī)緻。該細胞電(diàn)鏡下(x€↔↓ià)觀察主要(yào)由兩種細胞組成，即閏管細胞和(hé)分(fēn)™∑♦•泌細胞，有(yǒu)豐富的(de)染色質和(h• ≥'é)細胞器(qì)。此後，應用(yòng)該細胞又(yòu)建立₩✔∞了(le)人(rén)涎腺腺樣囊性癌肺高(gāo)轉移細胞系SACCLM。

1.2.5 ACC2、ACC3細胞系 腺樣囊性癌細胞系，為(wèi)肺低(dī)δ☆轉移細胞系,由上(shàng)海(hǎi)第二醫(yī)科(kē)大(dà₽•Ω✘)學附屬第九人(rén)民(mín)醫(yī)院口腔颌面外(wài)科(kē)何→₹‍ε榮根等^⑩于1988年(nián)建立。ACC2來(lái)源于右腭部小(xi↑αǎo)涎腺，ACC3源自(zì)右腮腺，蘇木(mù)精伊紅(hóng)染色細胞呈印戒狀×>，裸鼠皮下(xià)成瘤率為(wèi)100%。細胞角蛋白(bá ☆i)(CK)染色陽性證明(míng)該細胞有(yǒu)上(shàng★$↑∏)皮源性細胞的(de)特征;細胞黏液組織化(huà)學反應表明(míng)細胞內(nè∞★i)有(yǒu)對(duì)澱粉酶消化(huà)抵抗的(de)PAS和(h ♠≈∑é)阿辛藍(lán)染色陽性的(de)黏蛋白(bái)顆粒;電(diàn)鏡下(xià)細胞漿§α&₹內(nèi)有(yǒu)張力原纖維和(hé₹€‌)豐富的(de)分(fēn)泌顆粒，細胞間(jiān)有(yǒu)橋粒連接，≥  證實了(le)腺樣囊性癌起源于一(yī)種多(duō)能(néng)儲備幹細胞的(de)觀點，該₽♦ε$癌細胞在體(tǐ)外(wài)培養分(fēn)化(huà)程度下(xià)降。關曉峰♦€♠∏等^⑾在ACC2的(de)基礎上(shàng)建立了(le)肺高(gāo↓✔™β)轉移細胞系ACCM，該細胞實驗性肺轉移率★©↑為(wèi)96%。

1.2.6 NACC細胞系人(rén)小(xiǎo)涎腺腺樣囊性癌細胞系，來(lái¶∑)源于腭部，由農(nóng)曉琳等^⑿建立。該細胞系含有(yǒu)多(duō)種形态的(de)細胞$≤，方塊形細胞可(kě)能(néng)為(wèi)閏管細胞，類梭形細胞為←♣×β(wèi)肌上(shàng)皮細胞，核大(dà)、細胞質及細胞器(qì)少(sh≠¶γǎo)的(de)可(kě)能(néng)為(wèi)未分(fēn)化(huà)多(duō)能♣→₽(néng)幹細胞。該細胞4h貼壁率為(wèi)70%，高(gāo)峰₽&期分(fēn)裂指數(shù)為(wèi)6.8%，染色體≠₹±(tǐ)為(wèi)68～70條，亞三倍體(tǐ)占90%以上(ε☆♠©shàng)，這(zhè)與SACC83細胞系亞四倍體(tǐ)不(bù)同。$§裸鼠皮下(xià)接種成瘤率為(wèi)1δ→π00%。培養中可(kě)見(jiàn)分(fēn)泌黏¶™•液樣物(wù)質，免疫組化(huà)結果符合腫瘤性肌上(shàn ♣∏™g)皮細胞特性。NACC細胞系為(wèi)不(bù‌ §)同分(fēn)化(huà)程度和(hé)發育周期的(de≤<)癌細胞所組成的(de)細胞群體(tǐ)。

2、國(guó)外(wài)建立且常用(yòng)的(de)部分(fēn)細胞系

國(guó)外(wài)常用(yòng)的(de)細胞系以日(rì)本"§δ建立者居多(duō)，其與國(guó)內(nèi∞★ε∞)建立的(de)細胞系生(shēng)物(wù)學特性相(xiàng)似。見↔ ¥ (jiàn)表1。

3、人(rén)口腔癌細胞系的(de)共同特點

各種細胞系生(shēng)長(cháng)穩定，連續長(cháng)期傳代其€σ★♦生(shēng)物(wù)學行(xíng)為(wèi)變化(huà)不(bù)大(dà)&γ，與人(rén)體(tǐ)內(nèi)腫瘤組織有(yǒu)∏★相(xiàng)似或相(xiàng)同的(de)生(shēn→"g)物(wù)學行(xíng)為(wèi)↓₩₩↕。上(shàng)皮樣癌細胞電(diàn)鏡下(xià)均有&≥≥(yǒu)細胞橋粒、張力原纖維和(hé)角蛋白(bái)束。腺樣囊性癌細胞有(yǒu)較強的(d&≈±‍e)分(fēn)泌及合成功能(néng)，培β¶養觀察到(dào)其可(kě)分(fēn)泌黏液"πσ←樣的(de)物(wù)質，腺樣囊性癌源于多(duō)能(néng)幹細α±∞∑胞，由閏管細胞、分(fēn)泌細胞、肌上(shàng)皮¥♠細胞、多(duō)潛能(néng)幹細胞組成,為(w↑÷​èi)由分(fēn)化(huà)程度不(bù)一(yī)緻和(hé)處在細胞個(gè)體(tǐ)發∏"育周期不(bù)同階段的(de)細胞組成的(de)非均質體(tǐ)。黏液表皮樣癌具有γ§(yǒu)上(shàng)皮和(hé)黏液細胞癌兩者的(de)特點。

絕大(dà)部分(fēn)口腔癌細胞系均能(néng)★★★γ在裸鼠皮下(xià)接種成瘤，篩選到(dào)轉移性細胞系的(de)成瘤時(∏©σshí)間(jiān)較母本細胞明(míng)顯縮短(duǎn)^⑦⑩。但(dàn)是(shì)文(wén)獻報(b₹αΩ§ào)道(dào)腫瘤的(de)原代培養成功率低(dī)于30%，而↕∞建立一(yī)個(gè)永生(shēng)化(huà)¶↑÷δ的(de)穩定傳代的(de)細胞系其成功率λπ僅為(wèi)1%。李金(jīn)榮等改進了→↔(le)建系的(de)方法，将人(rén)口腔癌組織在裸鼠體(←¥tǐ)內(nèi)連續接種傳代後，提高(gāo)了(le)瘤體(tǐ)中細胞∞↑←α的(de)純度和(hé)體(tǐ)外(wài)适應↕"±能(néng)力，然後再進行(xíng)組織塊原代培養，易于建系。文(wé∞∞₹n)獻分(fēn)析了(le)381例腫瘤的(de)裸鼠移植規律，發現(xiàγ®n)人(rén)癌手術(shù)标本裸鼠異種移植≤ε>Ω的(de)成功率為(wèi)28.3%，其中複發性¥α$←腫瘤移植成功率為(wèi)50.0%，轉移性腫瘤表1國(guó)外(wà×✔i)建立且常用(yòng)的(de)部分‌÷×(fēn)細胞系縮寫名稱和(hé)(或)來(lái)源建系者或保藏機(jī)構HSC2人(&✘rén)口底癌細胞系日(rì)本國(guó)立癌研∞↑究中心HSC3、HSC4人(rén)舌癌細胞系OSC2¥≤、4、5、6口腔癌細胞系日(rì)本高(gāo)知(zhī)醫(yī)λ‌科(kē)大(dà)學AW13516、8507舌鱗癌細胞系TATAKE等^⒀AW10498下(xià)牙槽骨鱗癌細胞系AW9803磨牙後三角鱗癌細胞系HO1N‍ ♥1頰癌細胞系Ca922牙龈癌細胞系H1下(xià)牙龈癌細胞系HARADA等^⒁NOS1下(xià)牙龈癌細胞系JI等^⒂MSCC1牙龈癌淋巴結轉移細胞系KUDO等^⒃SAS舌鱗癌細胞系OKUMURA等^⒄SASL1、SASH1分(fēn)别為(wèi)舌鱗癌低(dī)轉移和(hé)高(↔​gāo)轉移細胞系SQUUA、B舌鱗癌細胞系MASAAYOMORIFUJI等SCCU✘φβM1、SCCUM2分(fēn)别為(wèi)舌鱗癌高(gāo)轉移、低(dī)®↕轉移細胞系NAKAYAMA等^⒅OSC19舌癌頸淋巴結轉移細胞系KAWAS↓∑ &HIRI等^⒆OSC20舌癌頸淋巴結轉移細胞系YOKOI等^⒇SCC9、15、25、66、111口腔癌SC"§C系列KBOECM1、686LN、1483、Tu183口腔鱗癌細胞系KOSCC♥✔♥11高(gāo)分(fēn)化(huà)下(xià)牙龈癌細胞系LEE等KOφ♠SCC25有(yǒu)A、B、C、D、E五✘δ&φ種，下(xià)牙龈癌細胞系KOSCC3‌ε3有(yǒu)A、B兩種，上(shàng)颌窦癌細胞系AMOSⅢ口底癌細胞系(無煙(∑÷yān)草(cǎo)吸食者)KAUR等SACC<•、CAC2涎腺腺樣囊性癌細胞系TYS、HSG涎腺癌細胞系為↓↔​(wèi)38.5%，均高(gāo)于原發瘤的(de)移植成功率20.5%，大(dà)約' ‌ 1/3的(de)人(rén)癌組織在裸鼠中可(kě)持續性生(shēng)長(chΩ &áng)建立人(rén)腫瘤瘤株,當腫瘤傳到(dào)第3代後，90%的(d¥ ∞™e)移植瘤株可(kě)成為(wèi)腫瘤細胞系。

總之，20多(duō)年(nián)來(lái)，國(guó)內(≠$™'nèi)、外(wài)建立的(de)口腔癌細胞系種類較多(duō)，這(zhè)些(xiē)細胞系γ♣×☆的(de)大(dà)部分(fēn)已為(wèi)我國(guó£≤)口腔癌的(de)基礎研究所應用(yòng♠→)，為(wèi)研究腫瘤的(de)生(shēng)物(wù)學特征，探明(míng∏±✘σ)口腔癌瘤侵襲和(hé)轉移機(jī)制(zhì)，進行(xíng)各種$λλ↑細胞和(hé)分(fēn)子(zǐ)水(shuǐ) Ω平的(de)幹預研究等提供了(le)極為(wèi)有(yǒu)用(yòng)的(de)∏& 實驗材料。能(néng)建立長(cháng)期生(shēng)長(δ✘☆cháng)、世代繁殖又(yòu)具有(yǒu)原發腫瘤的(de)各種生(shēng)物( ​‌ wù)學特征的(de)細胞系是(shì)一(yī)件(jiàn)具有(yǒu÷∞ )挑戰性和(hé)創造性的(de)工(gō$≤™ng)作(zuò)，往往花(huā)費(fèi)很(hěn)長(chán¶σβ<g)的(de)時(shí)間(jiān)，經δ≥≠過多(duō)次培養、多(duō)次失敗後才偶獲成功。建立具有(yǒu)自(zì)身(shēn)​±φ特色的(de)口腔癌細胞系，具有(yǒu)理(lǐ)論和(hé)實際意♥σ→>義。

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